Определение уровня лг и фсг. Анализы

Разработка высокоспецифичных иммуноанализаторов для определения концентрации гонадотропинов была сопряжена с некоторыми трудностями из-за высокой гомологичности гликопротеиновых гормонов и необходимости разделять свободные субъединицы и интактные гормоны. Перекрестная реактивность с а-субъединицей сделала невозможным точное измерение уровней ЛГ и ФСГ с помощью РИА, использующего поликлональные антитела. Кроме того, известна микрогетерогенность гонадотропинов, находящихся как в гипофизе, так и в свободной циркуляции, обусловленная разной степенью гликозилирования.

Вариабельность олигосахаридной составляющей и общего строения также вызывает микрогетерогенность заряда белка, что приводит к появлению сывороточных изоформ, разделяющихся при электрофокусировании в диапазоне рН 6,5-10,0. Несмотря на то что клиническое значение этой микрогетерогенности циркулирующих изоформ остается неизвестным, она влияет на иммунореактивность при определении их концентрации с помощью разных антител, что приводит к вариабельности результатов различных иммуноанализов.
Микрогетерогеность также влияет на биологическую активность, что обусловливает несоответствие результатов иммуноанализов и биотестов.

Другая проблема заключается в отсутствии подходящих эталонных препаратов для проведения иммунологических и биологических тестов. Международный эталонный препарат (МЭП) очищенного человеческого менопаузального гонадотропина (чМГ), полученного из мочи («Второй МЭП чМГ»), был утвержден Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) широко применялся для большинства иммунологических и биологических тестов. Характеристики МЭП, установленные биотестами, легли в основу производства всех последующих очищенных препаратов гипофиза, например Международного стандарта (МС) ВОЗ («Второй МС»). Большинство промышленно выпускающихся анализаторов стандартизированы по «Второму МС».



Однако, хотя их показатели биологической активности и стандартизированы в соответствии с МЭП или МС, иммунореактивность разных панелей для анализа варьирует в зависимости от специфичности используемых в них антител.

уровень ЛГ и ФСГ

В последние годы были разработаны методики двустадийного направленного иммунорадиометрического (ИРМА) или иммунохемилюминесцентного (ИХА) анализа, основанные па использовании двух моноклональных антител. Эти методики позволяют обойти многие недостатки РИА. Все анализы автоматизированы и исключительно точны — погрешность приближается к 0,1 мМЕ/мл. К тому же на их результаты не влияет наличие свободных а-субъеднниц и они лучше коррелируют с биотестами. Благодаря своей высокой чувствительности эти анализы могут проводиться в раннем пубертатном периоде для выявления малых концентраций гормонов.



В биотестах на ЛГ используются дисперсные клетки Лейдига мышей/крыс или линия клеток лейдигомы (МА-10) в культуре, а измеряется продукция тестостерона in vitro. Такие тесты оценивают биологическую активность циркулирующего ЛГ в физиологических условиях. Это важно, так как биологическая активность ЛГ изменяется при аномальном гликозилировании и нарушениях третичной структуры его молекулы. Сочетание биотеста и РИА позволяет вычислить соотношение биоактивности и иммунореактивности, индекс которого хорошо отражает количественные изменения молекулы ЛГ.

Несмотря на то что профили биоактивности и иммунореактивности ЛГ, как правило, тесно коррелируют при различных физиологических изменениях, при некоторых патологических состояниях между ними наблюдаются существенные расхождения. Например, инактивирующие мутации гена ЛГр-субъединицы приводят к повышению иммунореактивности ЛГ, но существенно снижают его биологическую активность. В биотестах для определения активности ФСГ in vitro используются гранулезные клетки или клетки Сертоли крыс, а измеряется продукция цАМФ или активность ароматазы в ответ на стимуляцию ФСГ. Чувствительность этих тестов составляет около 2,5 мМЕ/мл. Несмотря на то что биотесты in vitro имеют некоторую ценность для изучения физиологии гормонов, их повседневное клиническое использование проблематично из-за трудоемкости и существенных временных затрат.

Измерение уровней ФСГ и ЛГ применяют в диагностике функциональных расстройств половых желез. Повышенная концентрация ФСГ обычно наблюдается при яичниковой недостаточности, но также встречается и у пациенток с жизнеспособными фолликулами. Изредка повышение уровня гонадотропинов связано с гонадотропинсекретирующими опухолями гипофиза или эктопическими гонадотропинпродуцирующими опухолями.

Если у пациентки с аменореей выявлено повышение ЛГ при нормальном ФСГ с соотношением ЛГ/ФСГ >2 (частый, но необязательный признак), то можно предположить СПКЯ. Низкие уровни этих гормонов встречаются при гипофизарной или гипоталамической дисфункции и сочетаются с понижением уровня эстрадиола сыворотки крови. Для углубленной оценки гипофизарного резерва необходимо проведение провокационных проб с ГнРГ. Концентрация ЛГ и ФСГ определяется через 20 и 60 мин после внутривенного введения 100 мг ГнРГ. Отсутствие ответа на введение ГнРГ встречается при гипогонадотропном гипогонадизме- однако чувствительность и специфичность этого провокационного теста низка у пациентов, получающих экзогенные половые стероиды.

Видео: Кокляев: ПКТ #1 [Анализы после курса]

Видео: Анализ гормонов, эстрадиол и эстроген

Источник: http://meduniver.com
Похожее